全文获取类型
收费全文 | 19605篇 |
免费 | 2452篇 |
国内免费 | 9731篇 |
出版年
2024年 | 96篇 |
2023年 | 613篇 |
2022年 | 944篇 |
2021年 | 1248篇 |
2020年 | 1065篇 |
2019年 | 1269篇 |
2018年 | 869篇 |
2017年 | 830篇 |
2016年 | 937篇 |
2015年 | 1419篇 |
2014年 | 1798篇 |
2013年 | 1597篇 |
2012年 | 2136篇 |
2011年 | 2067篇 |
2010年 | 1580篇 |
2009年 | 1666篇 |
2008年 | 1820篇 |
2007年 | 1672篇 |
2006年 | 1532篇 |
2005年 | 1278篇 |
2004年 | 925篇 |
2003年 | 829篇 |
2002年 | 759篇 |
2001年 | 643篇 |
2000年 | 550篇 |
1999年 | 407篇 |
1998年 | 176篇 |
1997年 | 148篇 |
1996年 | 128篇 |
1995年 | 95篇 |
1994年 | 103篇 |
1993年 | 98篇 |
1992年 | 77篇 |
1991年 | 70篇 |
1990年 | 52篇 |
1989年 | 31篇 |
1988年 | 31篇 |
1987年 | 24篇 |
1986年 | 27篇 |
1985年 | 38篇 |
1984年 | 16篇 |
1983年 | 11篇 |
1982年 | 32篇 |
1981年 | 6篇 |
1980年 | 6篇 |
1978年 | 5篇 |
1964年 | 5篇 |
1958年 | 5篇 |
1953年 | 4篇 |
1950年 | 7篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 46 毫秒
81.
化学突变具有底物结合部位的单克隆抗体制备含硒抗体酶 总被引:3,自引:1,他引:2
开发了一种制备抗体酶的新方法。用二硝基氯苯(DNCB)专一地与谷胱甘肽(GSH)的巯基反应,合成出半抗原GSH-S-DNP。用戊二醛将半抗原偶联到牛血清白蛋白(BSA)上,制成全抗原。再用标准的单抗制备法获得具有GSH结合部位的单抗(4A4IgG)。用苯甲基磺酞氟(PMSF)和H2Se相继处理该单抗,则将单拉结合部位上的丝氨酸(Ser)突变成硒代半胱氨酸(SeCys,因而在单抗结合部位上引入了谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的催化基团。突变后的单抗具有GPX活性,其活力已达到天然GPX的数量级水平。动力学行为也与天然GPX类似。这种新的含硒抗体酶有优于GPX的一些特点。 相似文献
82.
人白细胞介素-3(humanInterleukin3,hIL-3)是一种造血前体细胞早期分化的关键调节因子。用PCR方法从人T淋巴细胞cDNA文库中扩增出0.44kb的DNA片段,并克隆入pUC19载体中。经DNA序列测定,确定0.44kb的PCR产物合完整的编码人白细胞介素-3成熟蛋白cDNA序列,并在信号肽与成熟蛋白编码序列之间通过突变引入了限制性内切酶位点和ATG起始密码。构建的PL启动子控制下的hIL-3cDNA表达质粒,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导,获得hIL-3的表达产物。SDS-PAGE电泳显示表达产物为15kd,约占细菌总蛋白的15%。表达产物经ELISA和Western-blot验证。hIL-3表达产物在细胞内形成包涵体,纯化包涵体,使产物纯度提高到70.8%,产物复性后,能明显促进hIL-3依赖细胞株生长,具有明显的生物活性。产物转移到PVDF膜后进行N端序列分析,N端16个氨基酸正确。 相似文献
83.
鸡马立克氏病病毒B抗原片段在大肠杆菌中表达 总被引:1,自引:0,他引:1
鸡马立克氏病病毒BamHI基因文库I3质粒中含有编码B抗原膜外Domain的DNA序列。经ScaI和SphI双酶酶解I3质粒,分离获得764bpDNA片段,并克隆进M13mp19中。DNA序列测定分析表明克隆片段为MDV-B抗原基因的494-1258bp部分序列。进一步分离NcoI-HindIII部分基因片(530bp),克隆于PLPromoter控制下的含有修饰型cIts857基因的表达载体中, 相似文献
84.
利用标记N-糖链的凝集素亲和层析法研究了佛波醇肉桂酸乙酸酯(PMA)对人肝癌细胞SMMC-7721表面糖蛋白上N-糖链结构的影响,发现100nmol/L的PMA处理5天后,可使细胞表面N-糖链中高甘露糖型和杂合型以及四天线、C2C2,6三天线复杂型的比例增高,而二天线复杂型降低。此结果与我们曾报道的视黄酸(RA)和双丁配环磷酸腺苷(db-cAMP)对该细胞表面N-糖链的影响相反。因RA和db-cAMP是SMMC-7721细胞的分化诱导剂,可抑制细胞生长;而PMA是该细胞的增殖促进剂,故细胞表面N-糖链的变化与细胞的分化和增殖密切相关。 相似文献
85.
HUIQUAN ZHAO YANG ZHAO JAMES J. NORDLUND RAYMOND E. BOISSY 《Pigment cell & melanoma research》1994,7(3):131-140
Human TRP-1 has been immunopurified from normal human melanocytes cultured from black neonatal subjects and used to investigate the catalytic function of TRP-1 for the two substrates, L-tyrosine and L-DOPA. Immunopurified TRP-1 did not demonstrate DOPA staining on SDS/PAGE nor DOPA oxidase (DO) activity with either routine or modified assays. The purified TRP-1 also demonstrated no tyrosine hydroxylase (TH) activity using the routine Pomerantz assay. However, there was apparent TH activity exhibited by immunopurified TRP-1 under conditions with low tyrosine concentration (≤0.8 μCi/ml of 3H-tyrosine), prolonged incubation time (i.e., overnight) and in the absence of the cofactor L-DOPA. Using these latter specific conditions, TH activity was also detected in cell lysates from a tyrosinase-negative albino melanocyte line which exhibited no TH activity with the routine Pomerantz assay. In addition, TH activity under low substrate assay conditions was not exhibited in a melanocyte line derived from a TRP-1 deficient, Brown albino individual. However, the absence of TH in this Brown albino cell line could be compensated for by the addition of L-DOPA to the assay. These results suggested that TRP-1 has some tyrosine hydroxylase but no DOPA oxidase activity. We propose that one function of TRP-1 is to modulate tyrosinase activity by making DOPA available as a cofactor to perpetuate the initial steps in melanogenesis. 相似文献
86.
观察了hFPIL6/2对6.5Gyγ线照射NIH小鼠第10天造血功能恢复的影响。结果表明:照射小鼠连续4d给予hFPIL6/2250μg·kg-1·d-1,其脾重、CFU-8、骨髓有核细胞数及CM-CFU分别比对照组增加59.0%、278.5%、57.9%和138.2%,统计学处理均有显著差异;对此四项指标的改善也明显优于25μg组。另外,250μg剂量组小鼠外周血象30d的动态观察结果表明,hFPIL6/2不但能明显提高红细胞和血红蛋白的最低值,而且能使血小板的恢复提前。提示hFPIL6/2在促进血小板生成和促进红系造血方面可能具有良好的应用前景。 相似文献
87.
本文记述乌蜂虹亚科Usiinae2新种,分别隶属于Usia(乌蜂虹属)和Parageron(拟驼蜂虹属),并对有关属的特征及分类情况作了概述。 相似文献
88.
89.
传染性软疣病毒(MCV)的电镜观察 总被引:1,自引:0,他引:1
传染性软疣病毒(MCV)的电镜观察李德忠,肖同浩,武晓华(广州军区武汉总医院电镜室,武汉430070)吴宁(广州军区武汉总医院皮肤科,武汉430070)关键词传染性软疣病毒,病毒形态,电镜观察曾有研究描述MCV的发育周期中有8种形态,也有按发育过程将... 相似文献
90.
臧宁 《中国生物化学与分子生物学报》1994,10(2):191-195
用大鼠肝脏门静脉或肝静脉周围的肝细胞来研究葡萄糖和酮体生成的区域分布。肝细胞通过毛地黄皂苷-胶原酶灌流技术分离。门静脉周围肝细胞的γ谷氨酰转肽酶的活性比肝静脉周围肝细胞高2.4倍;而谷氨酰胺合成酶的活性则相反,肝静脉周围肝细胞高出56倍。门静脉周围肝细胞的内源性葡萄糖合成比肝静脉周围肝细胞高1.57倍。给予刺激葡萄糖异生的底物,门静脉周围肝细胞的葡萄糖合成则增加1.7-2.1倍。肝静脉周围肝细胞的内源性酮体生成比门静脉周围肝细胞高1.3倍。给予能明显刺激酮体生成的辛酸盐,肝静脉周围肝细胞的酮体生成仅略为增加。我们的结果证实,在基础和刺激的条件下,葡萄糖的异生在门静脉周围肝细胞中优先,而酮体生成仅在肝静脉周围肝细胞占微弱的优势。 相似文献